RBM7在乳腺癌细胞BT474中的表达及其与P21的关系

更新时间:2023-05-28

【摘要】目的:探索RNA结合蛋白7(RNA binding protein 7,RBM7)在人源性乳腺癌细胞BT474中的过表达及干扰后的表达改变,并研究其与P21之间的关系。方法:在人源性乳腺癌细胞BT474中分别转染RBM7过表达、干扰慢病毒(实验组)和相应对照慢病毒(对照组),从而构建稳定转染的细胞株,用qRT-PCR和Western blot实验分别验证转染后的RBM7的表达情况。用CCK-8实验、流式细胞周期实验分别评估RBM7表达改变后对乳腺癌细胞增殖能力和细胞周期分布的影响。通过qRT-PCR和Western blot实验观察BT474细胞中RBM7表达改变后对P21表达的影响。进一步通过RNA结合蛋白免疫共沉淀(RIP)实验来研究RBM7与P21之间的关系。结果:在乳腺癌细胞BT474中分别转染RBM7过表达、干扰慢病毒48 h后,通过荧光显微镜检测细胞的绿色荧光表达情况;经嘌呤霉素稳定筛选后,获得RBM7过表达及干扰的稳转细胞株。CCK-8和流式细胞周期实验显示,过表达RBM7后可促进乳腺癌细胞的增殖,而干扰RBM7后能抑制乳腺癌细胞的增殖。qRT-PCR和Western blot实验显示,过表达RBM7能下调P21的mRNA(P <0.05)及蛋白的表达,干扰RBM7能上调P21的mRNA(P <0.05)及蛋白的表达。RNA结合蛋白免疫共沉淀(RIP)实验显示,RBM7能直接结合P21的mRNA从而发挥其对P21的调节作用。结论:RBM7在人乳腺癌细胞BT474中通过结合P21的mRNA从而下调P21的表达。

【关键词】 乳腺癌 RNA结合蛋白7 P21 细胞周期

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