α受体介导的雌二醇对大鼠结肠平滑肌细胞RhoA/ROCK通路的影响

更新时间:2023-05-28

【摘要】目的:探讨17β-雌二醇(17β-estraial,E2)对大鼠结肠平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC)RhoA/ROCK通路的影响。方法:体外分离培养Sprague-Dawley(SD)大鼠结肠SMCs。细胞免疫荧光双标法观察ROCK1、雌激素受体(ER)α与α肌动蛋白(α-SMA)共表达。不同浓度和不同时间E2刺激后,以反转录实时荧光定量qRT-PCR、Western blot检测RhoA、ROCK1表达。不同浓度ROCK抑制剂Y27632刺激后,Western blot检测E2对其下游蛋白表达情况。观察ER阻断剂ICI182780、牛血清白蛋白结合的E2(BSA-E2)、ERα激动剂PPT及ERβ激动剂DPN在E2影响RhoA、ROCK1表达的作用。构建ERα、ERβ的siRNA,观察E2刺激对转染后SMC中RhoA、ROCK1表达的影响。结果:细胞免疫荧光示结肠SMC上ROCK1与α-SMA共表达。50 nmol/L E2刺激24 h可显著抑制大鼠结肠SMC上RhoA、ROCK1表达(P <0.05)。Y27632可浓度依赖性抑制下游蛋白pMYPT1、p-CPI17、p-MLC表达。E2组及PPT组RhoA、ROCK1表达显著低于其他各组(P <0.05)。ERαsiRNA组可上调RhoA、ROCK1表达(P <0.05)。结论:大鼠结肠SMC上存在ROCK1,E2可抑制RhoA/ROCK通路表达,该作用由雌激素α受体介导。

【关键词】 雌二醇 RhoA/ROCK通路 平滑肌 结肠

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